1970年人们就有足够的理论知识来提出目前所用的快速DNA序列分析法。但当时在认识上和技术上存在两个问题：当时没有能把不同长度的核苷酸片断分离开的技术。当时的分析思路局限于RNA序列分析法

<aside> 💠 测序技术的发展历程

1st Generation Sanger sequencing: 双脱氧核苷酸中止法 - need many same sequence, once one sequence

2nd Generation Illumina Sequencing: 大规模平行测序 - Cluster Generation, Sequencing by Synthesis, Image Analysis

3rd Generation Single molecule Sequencing: 单分子测序 - polymerase/pore, from head to tail length, no need amplify

• 测序技术比较 </aside>

<aside> 💠 常见细胞分离技术：

• Micropipetting micromanipulation（口吸管技术）
• Laser capture microdissection，LCM（激光捕获显微切割技术）
• Fluorescence activated Cell Sorting，FACS（流式细胞仪技术）
• Microdroplets（微滴技术）
• Microwells
• Microfluidics（微流体技术）
• 磁激活细胞分选（MACS）
• 手工挑选细胞

• 质检：单细胞悬液的细胞活性大于80%。目前常用的是AO/PI染色和**台盼蓝染色法**
• 溶解细胞，获取遗传物质
• 扩增 </aside>

<aside> 💠 常用建库测序

外显子测序

small RNA-seq

单细胞mRNA测序

单细胞DNA测序

单细胞空间转录组测序

甲基化测序

单细胞核RNA测序

Moleculo长测序

Ribozero和方向性RNA文库

文库构建：

• Ribo-minus (remove too abundant r/tRNA transcripts, enrich for mRNAs + 非编码RNAs，原核生物 & RNA被降解[FFPE samples])
• PolyA (mRNA after splicing, enrich for exons, no tRNA/rRNA, little lncRNA, most popular, 真核生物)
• Strand specific (directionality of RNA - predict Pr, useful for novel lncRNA；更适用于转录组组装和重叠基因的准确量化，尤其是检测反义链上的转录本) </aside>