概述

<aside> ⭕ 表达载体（expression vector）

在克隆载体基础上，为使插入的外源DNA片段有效转录翻译成多肽，装有强化外源基因表达的强启动子以及利于表达产物分泌、分离和纯化的元件，这种载体称为表达载体

结构

• 普通载体元件：复制起始点ORI、选择标记、多克隆位点MCS
• 大肠杆菌操纵子元件：阻遏基因 I、操纵基因O、启动基因P、核糖体结合位点序列（SD）、转录终止信号区 </aside>

• [ ] 基因序列： 基因组序列（genomic DNA sequence ）、编码序列（coding sequence(CDS) ）、cDNA序列（complementary DNA sequence）
• [ ] RNA
  • mRNA：翻译成蛋白质
  • 结构RNAs：不会翻译成蛋白质
• 转录
• 翻译

大肠杆菌表达载体

<aside> 🎯 大肠杆菌基因表达载体——基因元件：

A. 转录元件

启动子 promoter

终止子 terminator

B. 翻译元件

• 核糖体结合位点 RBS（SD序列：UAAGGAGG）
• 翻译的起始密码子、终止密码子
• 表达标签(Tag) </aside>

阅读质粒图谱

融合表达载体

植物表达载体

目的基因与载体的连接

• [ ] 酶切位点连接——粘性末端连接方式
  • 同一限制酶切位点连接
  • 不同限制酶切位点连接
    • 配伍末端连接(同尾酶）
    • 非配伍末端连接
  • 去磷酸化防止载体自连
  • 末端磷酸化帮助克隆连接
• [ ] 同源重组连接