条件性基因敲除小鼠（也叫Flox小鼠）是指在目的基因中含有成对的loxp位点的小鼠，与Cre工具小鼠交配后可在特定的组织或细胞中敲除目的基因。

• 应用：胚胎致死性基因的研究；研究靶基因在特定组织或细胞中的功能；研究靶基因在特定时期或阶段发挥的作用。
• 优点：多功能的基因敲除模型，可与不同工具鼠灵活搭配使用，客观而系统地研究目的基因在不同组织器官发生、发育或疾病发生、治疗过程中的作用与机制；克服了重要基因完全敲除后的胚胎致死或过早死亡。
• 缺点：交配流程较为复杂；小鼠模型构建周期相对较长。

测试 新的Cre小鼠品系

条件性基因敲除小鼠【CKO】

获得 flox 纯合 且 cre阳性 的小鼠

（f/f；Cre-）×（f/+；Cre+）→f/f；Cre+

Flox小鼠基因型鉴定

要获得条件性基因敲除小鼠至少需要两步遗传杂交。第一步，将GeneX-Cre杂合子小鼠与GeneY-flox杂合或纯合子小鼠交配，获得的Cre与flox双阳性（GeneX Cre/wt; GeneY lox/wt）子代小鼠。第二步，将Cre与flox双阳性（GeneX Cre/wt;GeneY lox/wt）子代小鼠再与GeneY-flox杂合或纯合子小鼠交配，获得所需的GeneX Cre/wt; GeneY lox/lox小鼠为实验组。一般对照组为同窝GeneXwt/wt; GeneY lox/lox小鼠。如果Cre的整合破坏内源基因，那么应选择GeneX Cre/wt;GeneY wt/wt小鼠作为对照。

重组酶系统（如：Cre-loxP）介导的位点特异性重组技术。

以Cre/loxP为基础，利用组织特异性启动子特异性控制Cre在特定组织的表达，以实现在特定组织细胞中对目的基因的敲除或改造，也可以在Cre后加上ERT2，以实现在动物的特定发育时期对目的基因的敲除或改造。

• 条件性基因敲除的靶基因中必须带有可以被 Cre 重组酶识别的 loxP 序列，这种基因称为 floxed gene。
• 带有 floxed 靶基因的小鼠称为 flox 小鼠。在这种小鼠中，通常采用 DNA 同源重组方法，在拟敲除基因片段的两侧分别放置一个同向的 loxP 位点。
• loxP 位点的存在应不影响该基因的功能，故选择对照为flox/flox小鼠
• 除了 flox 小鼠以外，重组酶系统介导的条件性基因敲除还需要另一类重要的基因工程小鼠的参与——Cre工具鼠。
• Cre 工具鼠中，将 Cre 重组酶的编码序列置于特定的基因启动子下，Cre 的表达特性决定了靶基因何时何地发生敲除。
• Cre 在哪一种组织细胞中表达，靶基因的敲除就发生在哪种组织细胞；Cre 的表达水平将影响靶基因在此种组织细胞中进行修饰的效率；使用诱导型Cre 重组酶可以通过给予诱导剂，决定在特定的发育时期或疾病发生阶段，定时地进行基因敲除。
• 实验时，将 flox 小鼠和 Cre 工具鼠进行交配，最后获得 flox 纯合且 Cre 杂合的小鼠。在这类小鼠中，凡是表达 Cre 的细胞，两个 loxP 之间的序列被切除，从而实现组织特异性基因敲除。

目的基因组织特异性敲除效果验证

• （1） DNA水平cre活性验证
• （2） RNA水平cre敲除效率验证
• （3） 蛋白水平cre敲除效率验证