方法:用目的基因探针与文库中的重组载体进行Southern blot杂交

  1. 预处理 (1)用限制性内切酶将基因组DNA进行酶切。 (2)将酶切后的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳。 (3 )将电流出来的那块凝胶泡在强碱溶液中,此时双链的DNA样品变成单链DNA结构 (4)用酸中和,使单链DNA维持其单链状态
  2. 原位转移:将凝胶上的单链DNA转移到滤膜上。
  3. 固定:在真空烤箱里,80°C 下烤1-3h。将核酸样品进一步固定在滤膜上
  4. 杂交:将滤膜移在含有放射性同位素标记的探针分子溶液中,溶液上的单链DNA分子与探针分子通过互补配对进行杂交,形成杂种分子。
  5. 漂洗:将滤膜上没有和单链DNA样品结合的游离的探针分子漂洗下来,此后滤膜上只有杂交分子。
  6. 放射自显影:在X光曝射下进行放射自显影形成自显影图片。
  7. 比较鉴定:将放射自显影图片_上的谱带与凝胶上的谱带进行比较。确定与探针分子结合的DNA分子是凝胶上DNA链的那个片段。

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