DNA转座子系统的成员是最多的，包括大名鼎鼎的睡美人转座子（sleeping beauty transposon，SB）：
关于SB转座子的发现，这中间还有一个美丽的故事。科学家们犹如王子，唤醒了鲑鱼中已经失活了千万年的转座子系统，而在这个过程中，生物信息学分析方法起到了关键的作用。在1997年，Ivics等人通过生物信息学分析方法，找到了鲑鱼转座子的保守序列，从而确定了已经灭绝的鲑鱼中具有活性的睡美人转座酶的基因序列，随后对这个古老的转座子进行了分子水平的重建，最终成功唤醒了沉睡千万年的转座子活性，因而得名睡美人。
而今天我们要讲的是一个新的人工修饰的转座子系统：piggyBac piggyBac转座子最初于1983年在飞蛾体内发现，但直到2005年才成功用于哺乳动物细胞的基因编辑，它的特点有如下： （1）作为经修饰后的DNA转座子，piggyBac有两个组成部分，转座子和转座酶；（2）piggyBac转座酶促进转座子的基因组整合，尤其喜好基因组的TTAA位点； （3）转座酶也能以完全无缝的方式切除转座子，不留下任何序列或突变； （4）piggyBac具有较大的载货能力(已证明超过200 kb)，并且没有已知的上限。
piggyBac质粒
（1）红色箭头所指向的两个橙色小元件是piggyBac的末端重复序列（IR），这个序列可被转座酶识别并且切割，同样这个序列会倾向于转座至基因组的TTAA位点； （2）可以看到左右两个IR之间有新霉素和卡那霉素抗性基因（NeoR/KanR），可用于作为筛选标记。随后CMV、T7启动子后面接着的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）也可以作为筛选标记； （3）除第（2）描述的元件外，我们不难看到在NeoR/KanR两侧有loxP标记，因此在转座子整合成功后，还可以使用Cre将抗生素筛选标记切除，以免与后续基因编辑冲突。需要注意的是使用Cre后，基因组中会留下一个loxP位点，这将改变内源性DNA序列，从而导致细胞毒性； （4）需要注意piggyBac被整合到基因组之后，该转座子的IR序列还能被转座酶识别，从而完全无缝的切除piggyBac转座子。
下面根据所查到的资料以及个人使用经验，罗列自己能想到的使用注意事项： （1）piggyBac的投递方式是质粒转染，因此细胞的被转染效率非常重要； （2）使用piggyBac时，基因被完整地插入基因组，而使用标准的DNA质粒转染时，被插入基因可能出现双链断裂； （3）可以通过提高转座酶与转座子的比率提高转座子的整合率； （4）应用piggyBac构建过表达细胞系的时候需要注意基因过表达不是越高越好，过高的蛋白表达可能导致细胞死亡，因此转座酶与转座子的比率还需要使用者根据实际情况决定； （5）piggyBac倾向于整合到染色质开发区域，例如启动子和外显子区域，如果细胞的染色质结构经历了重大的重排（如当干细胞开始分化），任何整合的转基因一样，可能会发生转基因沉默。因此建议在分化过程中保留筛选标记，同时还可以使用PCR跟踪整合效率； （6）piggyBac可以和其他基因编辑手段结合，如CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs等，使得基因编辑更加灵活。例如和CRISPR/Cas9结合时，piggyBac可作为一个HDR模板被整合到基因组中，而后期还可使用转座酶移除； （7）piggyBac加载的片段太大时，有可能使ITR的核酸酶位点被破坏，从而防止再次切割。
