F. Bolivar和R.L. Rodriguez人工构建载体。

• 元件来源
  1. 复制起点： ori pMB1系列(来源于ColE1)的高拷贝型复制起点
  2. Ampr基因：pSF2124质粒的Ampr基因
  3. Tetr基因 pSC101的Tetr 基因。
• 长度：4363bp
• 选择标记：氨苄青霉素和四环素抗性
• 克隆位点：24个克隆位点，其中9个会导致Tetr基因失活（如BamH I、Hind Ⅲ、Sal I）；3个会导致Ampr基因失活（Sca I、PvuI、Pst I）。

pBR322的优点：

• 双抗菌素抗性选择标记：插入失活，分两次先后选择

  1. 没有获得载体的寄主细胞→ 在Amp或Tet中都死亡
  2. 获得载体的寄主细胞→ 在Amp或Tet其中之一中死亡

  

• 分子小，克隆能力大

  载体越小越好，>10kb的DNA在纯化过程中容易断裂。

• 高拷贝数

  氯霉素扩增之后，每个细胞可达 1000~3000copy

• 安全

  失去了转移蛋白基因mob(mobilization)。不 能通过接合转移。

pBR322的缺点

保留了转移蛋白（mob）的作用位点。能够被ColK质粒编码的mob蛋白识别，如果再有F质粒的参与，就有可能转移

pBR322的改进

• 删除mob识别位点：（如质粒pBR327、pAT153等）
• 改造EcoR I 位点