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基因药物在肿瘤治疗的应用主要采用以下手段:

基因工程(genetic engineering)

又叫遗传工程,包括基因重组、克隆和表达。指利用重组DNA技术有计划地对生物基因进行改造和重新组合,然后再插入、整合到事先准备好的受体基因组中,使重组基因在受体细胞内表达,从而使受体获得新的遗传特性,创造出具有某种新的性状的生物新品系或者形成新的基因产物

基因工程制药流程

获得目的基因——构建重组质粒——构建基因工程菌(或细胞)——培养工程菌——产物分离纯化——除菌过滤——半成品和成品鉴定——包装

获得目的基因

  1. 从基因组中直接分离

    密度梯度离心法,单链酶法,分子杂交法,限制性内切酶降解法

    问题:费时费事;内含子序列

  2. 反转录人工合成互补DNA

    以mRNA为模板,反转录合成互补的DNA片段;

    获取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因

  3. 化学合成(短)基因

  4. 聚合酶链式反应(PCR)

    扩增目的基因片段【高温变性、低温退火、适温延伸

载体

载体是运送外源DNA片段进入宿主细胞的工具,目前最常用的载体包括质粒载体、λ噬菌体、病毒载体等

克隆基因的检查和鉴定方法