上面这个系统虽然编辑效率提高了，但是编辑效率依然受到转化效率的限制，一般还是需要电转才能达到所需的转化效率，而且一旦哪次感受态细胞没做好，编辑实验就很容易失败。所以我要做的就是让基因组编辑不再依赖高转化效率。

前面的基因组编辑系统为什么需要高转化效率呢？我用一个简单的模型来描述下：假设一管感受态细胞有a个细胞，转化之后有1/b个细胞获得了Plasmid#2，而这些细胞当中有1/c被成功编辑，被成功编辑的细胞中有1/d形成菌落，那么最后能得到的阳性菌落数为N=a1/b1/c1/d。实际上，一管感受态细胞的数目大概就是1E9，1/b能达到1/100算不错，1/c能达到1/1000算不错，1/d能达到1/10算不错，所以最多也只能得到100-1000个阳性菌落。经验不够的操作者很难做到这样的结果。如果现在我在公式里加一个变量，变成N=a1/b2n1/c*1/d (n可以是任意正整数)，那会怎么样，是不是瞬间觉得1/b、1/c、1/d都不重要了，数值再小也没事。为了做到这一点或部分做到这一点，我把控制Cas9和sgRNA表达的启动子都换成了严谨性强的诱导型启动子PBAD。在将Plasmid#2转化之后，Cas9和sgRNA不会表达，这时只要有一个细胞获得了Plasmid#2，就可以通过细胞复制得到无数个含有Plasmid#2的细胞。当细胞数足够多之后再诱导Cas9、sgRNA和重组酶表达，从而启动基因编辑反应，这样可以将编辑效率提高100倍以上。