PCR既能用于扩增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新设计任何天然核苷酸序列的两个末端。因此，任意两个天然存在的DNA序列都能快速有效的扩增，并拼接在一起。【对】

开放阅读框架

下面的DNA序列包含一个编码仅4个氨基酸的基因序列。

5’-TCATGCTAGACACGTAATAGCATATGGGA-3’

3’-AGTACGATCTGTGCATTATCGTATACCCT-5’

请写出

（1）基因的开放阅读框

（2）启动子在该序列左侧还是右侧？

引物设计：

要求将下面A基因的开放阅读框（ORF）克隆至载体pGEX-4T-1（GST-融合蛋白表达载体）相应位点上，并获得A基因的表达。

• 开放阅读框（ORF）
• （1）A基因ORF内部不含有的限制性内切酶识别位点序列：
• （2）限制性核酸内切酶识别的碱基序列如下：
• （3）pGEX-4T-1载体图谱。

题目要求：

请设计1对PCR引物，写出上游引物P1和下游引物P2 的引物序列并手工计算的引物P1和P2的Tm值

• 不能引起三连密码子移位
• 内切酶位点——添加保护碱基