<aside> 🛖 浓缩胶
在浓缩胶中,其pH6.8环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,跑的最快,两者之间形成导电性较低的区带,产生高电位梯度(电位与电导率成反比),蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压梯度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。
浓缩胶浓度5%,凝胶孔径较大,基本没有分子筛效应
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<aside> 🛖 分离胶
当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加pH 8.8,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
甘氨酸的等电点为5.97
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10%过硫酸铵现配现用(不要用放太久的,未使用完4*C储存)
#胶的浓度根据蛋白分子量来定
支持物: 单体丙稀酰胺(Acr)
交联剂: 甲叉(or亚甲)双丙稀酰胺(Bis)
聚合催化剂:
1、核黄素(光聚合)制大孔胶
光聚合:催化剂是核黄素(VB2),在痕量氧存在下,核黄素光解形成无色基,无色基再被氧氧化成自由基,激活单体发生聚合。
化学聚合形成的凝胶孔径较小,且重复性好,用来制备分离胶
2、过硫酸铵(NH4)2S2O3(APS)(化学聚合)用来制小孔胶
化学聚合:引发剂是过硫酸铵(AP),催化剂N、N、N’、N’-四甲基乙二胺(TEMED),它的碱基催化AP产生氧自由基,激活单体形成自由基,发生聚合。
化学聚合形成的凝胶孔径较小,且重复性好,用来制备分离胶
加速剂:N,N,N’,N’,--四甲基乙二胺(TEMED)
产物:三维网状结构的凝