• 目的基因：准备要分离、改造、扩增或表达的基因
  • DNA Structure
  • DNA Function

基因组DNA片断化

• [ ] 限制性内切酶法：用限制性内切酶把基因组DNA切成不同大小的片断

  特点：由于带有粘性末端，产物可以直接与载体连接；目的基因内部也可能有该内切酶的切点。目的基因也被切成碎片

• [ ] 随机片断化

  • 限制性内切酶局部消化法
  • 机械切割法：超声波、高数搅拌

化学合成目的基因

• 历程
• [ ] 人工化学合成法
  • [ ] 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其对应的多肽链氨基酸序列；较短的DNA片段，有专一性和定向性 - - - - 自动化DNA合成仪
  • [ ] 原理：第一个核苷酸固定于不溶性的固相载体上，然后按预定顺序从该核苷酸开始，以3’, 5’-磷酸二酯键与另一核苷酸进行缩合反应（封闭非反应基团)， 其后用洗涤法除去多余的反应物和副产物，,再用同样的步骤与下-个核苷酸进行缩合反应，如此循环将合成的寡核苷酸链从载体上洗脱下来，解除保护基，进一步纯化。

<aside> 🍁 化学合成DNA片断的方法

• 磷酸二酯法
• 磷酸三酯法
• 亚磷酸三酯法
• 固相合成法
• 自动化合成法 </aside>

<aside> 🍁 化学合成DNA片断的组装

原因：化学合成的DNA片断一般在200bp以内

• 互补连接法
• 互补延伸连接法 </aside>

<aside> 🍁 寡聚核苷酸 - - - 应用

• 合成较小的基因

  当mRNA的含量很低，很难作cDNA；有些基因比较短，化学合成费用较低

• 合成引物（20mer左右）

• 合成探针序列

• 定点突变合成：合成带有定点突变的基因片断

• 合成人工接头或衔接物

  含有各种酶切位点人工接头（Adaptor）或衔接物（Linker）序列

</aside>