抗体对抗原的严格特异性使之成为细胞生物学的一种有力工具。免疫细胞化学技术(immunocytochemistry, ICC)是利用免疫学中抗原抗体特异性结合的原理来定性和定位研究器官、组织和细胞中的生物活性大分子的技术。
用荧光染料标记的抗体,在荧光显微镜下,可以对细胞中的特殊分子进行定位。
将电子密度高的胶体金标记抗体,则可在电镜下高分辨观察特定分子的分布情况。
为了提高检测其灵敏度,可以将荧光物质或酶类标记与一级抗体结合的抗体(二级抗体),而不是标记与抗原直接反应的抗体(一级抗体)。每个一级抗体上可以结合多个二级抗体,因此进行荧光检测或酶与底 物的显色反应,可大大增加信号的强度。
[ ] 什么是单克隆抗体?
单克隆抗体由高度特异的蛋白质组成,可以识别抗原上的单一表位。单克隆抗体是由杂交瘤在体外产生的,杂交瘤是一种永生化的细胞系,具有像B细胞一样产生抗体的能力。
如何生产用于研究的单克隆抗体?
[ ] 什么是多克隆抗体?
一旦监测免疫细胞检测到宿主体内的抗原,免疫系统就会经历一连串的分子事件,诱发受刺激的B细胞产生多克隆抗体。多克隆抗体由生物化学上不同的副位组成,即抗体延伸【臂】上的抗原结合位点,能够与同一目标抗原上的不同结合位点特异性结合。
如何产生用于研究的多克隆抗体?
属性 | 单克隆抗体 | 多克隆抗体 |
---|---|---|
抗体群体 | 同质性 | 异质性 |
结合特异性 | 识别目标抗原上的单一表位 | 识别目标抗原上的多个表位 |
灵敏度 | 蛋白质定量方面灵敏度高 | 对低数量的蛋白质有较高的灵敏度 |
交叉反应 | 特异性高,交叉反应低 | 存在生物物理多样性,交叉反应高 |
生产成本 | 昂贵 | 低廉 |
来源 | 受刺激的B细胞的单系:杂交瘤 | 受刺激的B细胞的多个系别 |
定义多克隆抗体和单克隆抗体有用性的两个关键特征涉及它们各自对抗原的特异性和灵敏度。
抗体的特异性是由其结合域和目标抗原之间的相对亲和力决定的,而其他分子是存在的。对这种特异性的利用对免疫学研究人员和临床医生来说是至关重要的,因为许多应用都是利用多克隆和/或单克隆抗体来专门检测目标分子。结合抗原特异性,抗体的灵敏度是一个重要的参数,决定了它在实验室的实用性。
高灵敏度的抗体非常适用于诊断应用,如免疫沉淀、West Blot和酶联免疫吸附试验(ELISA),因为它们能够识别低水平的目标抗原。
免疫沉淀是一种分析技术,通过使用特异性结合抗原的抗体将抗原从混合物中分离出来。然后用固定化抗体或磁珠对产生的抗原-抗体复合物进行进一步处理,从而使抗原-抗体复合物在分析前从混合物中分离出来。
与免疫沉淀法一样,ELISAs 可以使用多克隆或单克隆抗体来检测溶液中的目标抗原。
间接和夹心ELISAs是两种免疫测定形式,在整个过程中使用两种类型的抗体:单克隆抗体由于对目标抗原的高特异性,通常首先应用(一级)
;多克隆抗体由于能够以高灵敏度放大低信号,因此作为二级试剂更有用
除了ELISA,抗体对于免疫组化和流式细胞仪等检测技术也很有用,因为它们可以以高分辨率检测复杂组织或细胞内的抗体-抗原构建。
生产企业对抗体特异性和灵敏度的确认使得像ELISAs这样的免疫测定可以根据抗原和抗体的使用方式而采取不同的形式,这使得这些测试具有高度的通用性。
例如,一种免疫测定需要高度敏感的测试来检测一种未知的病原体,由于多克隆抗体能够识别一种抗原上的多个表位,因此会从多克隆抗体中获益。如果一个病原体或抗原先前已经被定性,那么在下游应用中使用单克隆抗体来进一步定性可能更合适。
在实验室外,抗体可以被用来增强、模仿或恢复免疫系统攻击疾病目标的能力。除了一些例外,单克隆抗体比多克隆抗体更适合于治疗目的,因为它们具有同质性,对单一表位的高特异性和低程度的交叉反应。
这些特性对于有效的癌症治疗特别重要,因为肿瘤细胞能够逃避或阻断免疫系统。单克隆抗体疗法对癌细胞发挥作用的一些方式包括涉及直接结合以诱导细胞死亡的机制和阻断肿瘤生长因子和血液供应的间接机制[9]。