<aside> 🍁 四环素诱导系统，也叫强力霉素（Dox，四环素衍生物）

四环素【tetracycline, Tet】；选择性关闭，开放基因的表达；该系统有两种模式

• Tet-off：四环素控制反式激活因子（tTA）
• Tet-on：反向四环素控制反式激活因子（rtTA） </aside>

• 背景

四环素响应元件（TRE），通常是一个19个核苷酸的四环素操作符(tetO)序列的7个重复，**被四环素抑制因子(tetR)**识别。在内源性细菌系统中，如果四环素或其类似物（强力霉素）存在，tetR将与四环素结合而不与TRE结合，从而允许转录。

四环素依赖的启动子是通过在最小启动子的上游放置TRE来开发的。

四环素关闭系统

Gossen和Bujard发展的初始系统被称为四环素脱落：在四环素存在的情况下，来自tet诱导启动子的表达减少。为了利用四环素作为基因表达调控因子，我们开发了一种四环素控制的反激活因子(tTA)。

tTA：通过将tetR与单纯疱疹病毒的VP16(病毒粒子蛋白16)的C端结构域融合而成

四环素诱导基因表达关闭

**在没有四环素的情况下，tTA的tetR部分会结合这些tetO序列，激活区域促进表达。在四环素存在的情况下，四环素和四体结合。这就阻止了tTA与tetO序列的结合，进而通过激活区域增加表达，导致基因表达减少。**这种混合反激活剂的想法最初用于lac系统。四环素脱落也被称为tTA依赖系统。

四环素诱导基因开启系统

Gossen等(1995)采用随机诱变的方法来鉴定四聚体中哪些氨基酸残基对四环素依赖的抑制是重要的。突变这些残基导致了一种反Tet阻遏物(rTetR)的产生，它逆转了表型，并依赖四环素的存在进行诱导，而不是抑制。通过将rTetR与VP16融合，产生了新的转激活子rtTA(反向四环素控制转激活子)。四环素依赖体系也被称为rtTA依赖体系。

实验技巧

• 选择Tet系统
• 基本组件
• 使用四环素或其衍生物