<aside> ⭕ Pt7-----T7噬菌体的启动子
需要T7噬菌体自身合成的RNA聚合酶识别——因此宿主细胞必须能表达T7噬菌体的RNA聚合酶。
**大肠杆菌BL21(DE3)菌株：**染色体BL21区整合一个λ噬菌体DNA，在λ 噬菌体的DE3区有一个T7 RNA聚合酶基因(T7基因1)，该基因受lacUV5启动子控制
T7 RNA聚合酶能选择性的激活T7噬菌体启动子的转录，其合成mRNA的速度比普通大肠杆菌的RNA聚合酶快5倍左右。
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T7 RNA聚合酶的基因插入大肠杆菌为表达的基因
<aside> ⭕ 启动子的控制效应:
在pET载体上装载lacI基因，提高阻制物的浓度，同时也可利用T7-lac启动子(在T7启动子序列下游装入一个由25bp组成的lacO操纵子序列)，当阻制物结合在lacO位点时，即使存在T7 RNA聚合酶，外源基因也无法表达。只有当诱导物IPTG存在时，才能解开 T7 RNA聚合酶基因和外源基因表达的双重阻遏——靶基因前有lacO：防止基因泄漏，确保基因表达完全受控
</aside>
以下举例理解「不可孤立地选择启动子，还需考虑帮助发挥其功能的其他条件」
图为一个过表达载体，可见载体上除了T7启动子还有lacI基因，lac操纵子。
T7启动子常被用于蛋白质过表达，功能强大且特异性强，完全受控于T7 RNAP，当T7 RNAP存在于细胞内时，相比宿主表达系统，T7表达系统占据绝对的优势，其表达速度是前者的5倍。
但正常情况下，大肠杆菌中不存在T7 RNAP，所以在蛋白质过表达时通常选择使用BL21（DE3）这株工程菌，该菌株染色体中整合了噬菌体DE3区，该区含有T7 RNAP基因及其启动子lacUV5，可以表达出T7 RNAP；并且该菌株缺少Lon蛋白酶、OmpT蛋白酶，可以减少对重组蛋白的降解。
此外，lac操纵子结构与T7启动子结合使用，可以使表达载体只在受到IPTG或乳糖诱导时才大量表达目的蛋白，而未受诱导时，保持较低的本底表达水平，避免因目的基因过表达而影响细胞及质粒的稳定性。
载体pET-28b的主要构成元件
T7噬菌体启动子、核糖体结合位点、His6标签序列、凝血酶切割位点、多克隆位点、 T7噬菌体终止子、pBR322复制子、氨苄青霉素筛选标记序列等。
