RNA pull-down 作为研究 RNA 与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点,是近年来研究IncRNA、circRNA与蛋白质相互作用的主要手段。其以RNA为主角,研究其与蛋白的互作。
RNA pulldown的原理:使用体外转录与生物素标记RNA,然后与细胞或组织的提取液进行孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物与链霉亲和素磁珠结合,通过磁分离与孵育液中的其他成份分离。再利用游离生物素竞争洗脱复合物,通过WB实验检测特定的蛋白是否与RNA相互作用,或者运用质谱筛选RNA结合的未知蛋白。