核糖2‘位的羟基:在水溶液中容易发生变构,使RNA结构不稳定)
,关键在于能否完全抑制或除去RNA酶(分布广,且不易失活
)的破坏作用,获取完整的全长RNA分子
二乙基焦碳酸(0.1%DEPC)处理所有溶液和器皿(不耐高温),操作者戴手套、口罩
高温抽提,Rnase抑制剂等
<aside> 🚫 RNA的抽提
<aside> 🚫 真核生物mRNA的分离
纤维桩加入总RNA(溶于NaCl溶液)- - -NaCl溶液洗脱rRNA, tRNA- - - H2O洗脱mRNA,并收集
</aside><aside> 🚫 RNA的检测
浓度、纯度检测:可通过紫外分光光度仪测试
纯度检测:琼脂糖凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 </aside>
[ ] 提取的RNA可用于:Northern杂交、RT-PCR、定量PCR、mRNA分离、cDNA合成