接下来，就用Nextera方法，对扩增好的片段，进行打断，并加上末端标签。

Nextera打断的原理，是用结合了DNA标签的转座酶，和之前扩增得到的10KB的DNA片段进行反应。

转座酶，一方面，会把长片段给切断成短的小片段。

另一方面，它也会把酶本身结合了的DNA标签，连在切出来的小片段DNA的末端上。

这个新加上的DNA标签，就成了接下来PCR扩增的引物结合序列。

再接下来，就是加入有P5、P7测序引物序列，同时带有Index序列的PCR引物，进行新的一轮PCR扩增。

那么这一轮PCR扩增的结果，就会把Index序列，和P5、P7测序引物序列都加到扩增出来的DNA片段上。

这一轮的扩增完成之后，我们就得到的，就是384个带了完整的接头序列、Index序列的文库。

再接下来，就把这384个文库混合在一起，用柱子进行回收。

然后，就可以用Illumina测序仪进行测序了。