荧光素酶实验（Luciferase Assay）通常用来检测蛋白-蛋白及蛋白-基因之间的相互结合，如转录因子对启动子的调控机制，启动子的活性验证及蛋白分子之间相互作用等。与其他方法相比，荧光素酶实验不需要显微镜级别的检测仪器和严苛的检测环境，就能够对完整组织进行准确、快速、实时定量。
荧光素酶(Luciferase)的原理是利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。可将海肾荧光素酶基因的质粒作为对照质粒。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
[ ] 问题1：为什么要用荧光素酶实验来做检测，不用其他报告基因来做，GFP可以吗？
采用荧光素酶来做实验是由其自身的优势所决定的：（1）蛋白不需要翻译后加工，所以一旦翻译立即产生报告活性；（2）在所有的化学发光反应中，它的光产物具有最高的量子效率，因而非常灵敏。另外，在宿主细胞及检测试剂中均检测不到背景发光；（3）检测快速，每个样品只需几秒钟。以上优势使其成为广大科研工作者做相关验证实验的首选，其他报告基因由于种种缺陷一般不作为研究手段。
[ ] 问题2：双荧光素酶实验为什么要加luciferase底物（luciferin）？
因为我们构建的双荧光素酶系统是催化酶，要发光需要底物，催化酶催化底物才能产生荧光。
[ ] 问题3：为什么要用两个荧光素酶，海肾荧光素酶的作用是什么？
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。同时，为了减少内在的变化因素（如：培养细胞的数目和活力的差别，细胞转染和裂解的效率等）对实验准确性的影响，将带有海肾荧光素酶（Rinilla luciferase)基因作为对照与报告基因共转染细胞，提供转录活力的内对照，使测试结果不受实验条件变化的干扰。
①启动子活性研究：
②基因3’UTR区和microRNA结合实验：将预测能够与miRNA结合的靶基因3’UTR序列插入载体中萤火虫荧光蛋白（firefly luciferase）的3’UTR。当我们感兴趣的miRNA和质粒中的插入序列结合后，miRNA会通过和所插入的序列结合从而抑制萤火虫荧光蛋白的翻译最终造成荧光值的下降。海肾素荧光蛋白（renilla luciferase）作为内参来去除组间的转染效率差异。