<aside> 🍁 GAL4/UAS系统:是一种转基因技术体系,其原理是利用特定的启动子或增强子,以组织特异性的方式激活酵母转录激活子GAL4的表达,GAL4又以同样的方式引起GAL4反应元件(UAS)-靶基因的转录。可以用于:基因过表达、基因敲除、细胞特异缺失
Binding domain(BD)
与UAS序列结合后,其Activity domain(AD)
和promoter区域结合,从而诱导基因的表达。**Gal**80**抑制Gal**4**转录活性**【温度敏感性:18C结合Gal4,29C / 半乳糖 解除转录抑制活性】
关键点:
- GAL4基因UAS-靶基因分别存在于两个转基因系中。
- GAL4转基因系:有转录激活子,但没有靶基因,体系的建立需要组织特异性的启动子或增强子
- UAS-靶基因系:靶基因在UAS 下游,转录激活子不存在,因而靶基因处于沉默状态。
- 只有将GAL4转基因系与UAS-靶基因系进行杂交,才可能产生特异表达靶基因的后代
位置效应
,不同的插入位点会引起基因表达的不同。引起子代靶基因表达的差异的因素:GAL4必须积累到足够的浓度才能激活UAS-靶基因,存在一个延迟效应,导致UAS-靶基因的转录滞后于启动子-GAL4转录
;在启动子-GAL4转录停止后,细胞中还未降解的GAL4蛋白仍可继续驱动UAS -靶基因的表达,从而延长了UAS-靶基因的表达
**
</aside>常用的报告基因有lacZ、GFP 等。