连接DNA双链中的单链切口

大肠杆菌和其它细菌的DNA连接酶要求NAD+提供能量；

在高等生物和噬菌体中的DNA连接酶，则要求ATP提供能量。

T4噬菌体的DNA连接酶不仅能连接双链DNA上的粘性切口，而且能连接无粘性末端的平头双链DNA。

DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用。