末端脱氧核苷酸转移酶（terminal transferase， TdT)

• 来源：小牛胸腺
• 组成：大小两个亚基，分子量60KD
• 特性：5’—>3’DNA聚合酶活性

末端转移酶的用途

• 同聚物加尾
• 将DNA分子的平末端转化为粘性末端
• 非放射性标记DNA片断的3’端
• 再生酶切位点便于回收克隆片断

碱性磷酸酶（AP）

• 种类：BAP、CIP、SAP
• 特性：催化脱掉DNA（或RNA）5’端的磷酸根，使5‘-P转换为5’-OH
• 功能：防止线性化的载体份子自我连接

T4多核苷酸激酶

• 来源：从T4感染大肠杆菌细胞中分离出来。多种哺乳动物细胞中也发现这种酶。
• 功能：催化γ磷酸从ATP转给双链或单链DNA或RNA的5’-OH端（不论5’-OH端突出与否）【天然的DNA5’端是磷酸化的】

用途：DNA 5’-OH端磷酸化、标记DNA的5’端

• 正向反应（forward reaction）
• 交换反应标记法

甲基化酶

• [ ] 甲基化酶种类

  真核

  • DNMT I 甲基化酶

  原核

  • 大肠杆菌
    • DNA腺嘌呤甲基化酶（dam酶)
    • DNA胞嘧啶甲基化酶（dcm酶)
    • EcoK I 甲基化酶
  • 螺旋菌
    • Sss I 甲基化酶

• [ ] 依赖甲基化的限制系统

  至少三种；只识别甲基化序列，都限制M.Sss 1作用的DNA；都不限制Dcm修饰的位点

• [ ] 对甲基化敏感度

  敏感：酶切时的DNA需从特定甲基化酶失活的菌株中提取

  不敏感

• 甲基化对限制酶切的影响

  • 修饰酶切位点
  • 产生新酶切位点
  • 基因组作图时利用内切酶对甲基化的敏感性差异