dCas9(dead Cas9)与效应器阻遏(如蛋白和激活剂结构域)形成融合蛋白,能在gRNA的作用下识别相关序列,只结合DNA分子,不进行酶切,可以将这些效应器带到启动子区域、调控区域或编码区域,对基因的转录实现正向或负向调控;,其抑制基因表达的效率远高于RNA;基因调控可逆
基于 CRISPR/dCas9 的基因表达调控技术。
除了直接对 DNA 进行编辑,CRISPR/Cas 系统在基因表达调控上也可发挥作用。例如,利用 dCas9 无核酸内切酶活性但仍能与 DNA 结合的特点,可直接阻碍其结合 DNA 与其他因子的结合,影响基因的表达)。如果将转录抑制因子或者激活因子与 dCas9 融合,则可以实现靶基因的抑制与激活,为基因功能研究提供灵活的手段。
dCas9 as a modular system for attachment of transcriptional regulators.dCas9 can easily be fused to effectors (either transcription activators orrepressors) for targeted gene regulation. Adapted from Figure 1a of Gilbert etal.
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🐞 dCas9-SAM—CRISPR Cas9 **基因激活系统**
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🐞 dCas9-KRAB—CRISPRCas9 **基因抑制系统**
表观遗传调节是往往是通过影响一段染色质的结构起作用,比如将染色质压缩成紧密状态(异染色质),使基因难以转录,或者使染色质打开以促进转录。表观遗传调节包括DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、组蛋白磷酸化等等。
<aside> 🐞 人们将dCas9与表观遗传修饰酶融合在一起,形成dCas9表观遗传编辑系统
改造的dCas9,加上了胞苷脱氨酶,可将胞嘧啶C转变为尿嘧啶U,从而实现在DNA复制时发生碱基对替换。
- 基于 CRISPR/dCas9 的单碱基编辑技术。