印迹膜孔径的选择

随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但膜孔径如果小于0.1μm,蛋白的转移就很难进行，以我们通常用0. 45μm和0 2μm两种规格的膜。大于20KD的蛋白用045μm的膜，小于20KD的就用0.2um的膜。

膜在使用过程中需要注意

1. PVDF膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡1-5秒钟，以活化膜上的正电基团; NC膜纯度越高，韧性越差，容易损坏，尽量减少操作并且动作轻柔。
2. 要使蛋白质组分能有效的从凝胶转移到固相纸膜上，缓冲液的PH值很重要。有些分子量不是很大的蛋白质区带，即使延长电转印时间也不能从凝胶转移到膜上。这是由于蛋白质在转移缓冲液中怡好处于等电点状态造成的,因此应适当为变转移缓冲液的PH以利于转膜。
3. 湿转选择恒流，恒流150 -200mA，10KD以下转30-40分钟， 10 30KD转印40-50分钟，30-100KD转印60-70分钟100KD以上转印90-120分钟，以实际的转膜效果适当调整。