细胞破碎：通过各种方法使细胞外层结构破坏的技术过程——使胞内酶释放

酶 存在位置

• 胞外酶：分泌到细胞外或细胞质膜与细胞壁间的酶，一般为水解酶类
• 胞内酶：在细胞内起催化作用的酶；多数酶

细胞壁的主要成分

细菌：肽聚糖(N-乙酰萄糖胺，N-乙酰胞壁酸)

酵母：葡聚糖，甘露聚糖，蛋白质

真菌: 多糖（几丁质和葡聚糖）

动物细胞无细胞壁，较容易被破碎。

细胞破碎的方法

<aside> 🧩 机械法

通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎

• 捣碎法：悬浮-----—高速旋转叶片
• 研磨法：研钵、电动球磨机
• 匀浆法：破碎程度高，剪切力----易分散，颗粒细小，脆嫩的组织
• **胶体磨：**流体或半流体物料，提高磨盘的精密度与线速度 </aside>

<aside> 🧩 物理法

通过各种物理因素（温度、压力、声波...）的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎-—--多用于微生物细胞

• 温度差法：较高温 （不可过高--—酶失活）<——>低温 【热胀冷缩】脆弱细胞－革兰氏阴性菌- -难以工业化

• 压力差法

  渗透压差法—— 对数生长期的革兰氏阴性菌、红细胞（膜结合酶、细胞间质酶....）

  突然降压法——出口降压法、爆炸式降压法（高压通N2/CO2振荡一＞气体扩散到胞内-＞突然排气）

  高压冲击法-——活塞/冲击锤-＞高压

• 超声波法

  利用10～25 kHz超声波，使细胞膜产生空穴（声波颤动通过液体时形成局部减压成为空穴作用）而破碎。防酶失活：冷库中进行、冰浴中间歇进行

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<aside> 🧩 化学法

化学试剂破坏细胞膜

• 有机溶剂：破坏细胞膜的磷脂结构，改变膜通透性 ——丙酮、丁醇、氯仿
• 表面活性剂：作用磷脂和脂蛋白，改变膜通透性 —— 吐温、TritonX-100
• **溶胀：**溶胀是在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物 </aside>

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酶促破碎法

细胞本身酶或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎

• 自溶法：本身酶系，加适当防腐剂
• 外加酶法：外加酶使细胞壁破坏，再置低渗溶液中破碎。 </aside>

判断细胞破碎

1. 直接测定破碎前后的细胞数： 破碎前，用显微镜或电子微粒计数器直接计数 破碎后，用染色法区分破碎细胞与完整细胞
2. 测定导电率： 利用破碎前后导电率的变化测定破碎程度
3. 测定释放的蛋白质量或酶活力： 测定破碎液中胞内蛋白质或目的酶的释放量，估算破碎率