• 首先由H.O. Smith和K.W. Wilcox在1970年从流感嗜血菌中分离出来。分离的第一个酶是HindⅡ.

• [ ] 通常

  识别位点序列

  未甲基化修饰的双链DNA上的特殊靶序列（4-8bp或更长，多数是回文序列）。

  与DNA的来源无关。

  切割位点

  • 一般在 识别位点处

  • 切开双链DNA，形成粘性末端（sticky end）或平齐末端（blunt end）。

    黏性末端- - - -含有几个核苷酸单链的末端。

    • 类型：5’端凸出、3’端凸出
    • [ ] 意义
      • 连接便利
      • 5'末端标记
      • 补或切成平齐末端

    平末端- - - - 在回文序列的对称轴处同时切割DNA双链。

  • 限制性内切酶对DNA的消化：内切酶与识别序列的结合模式 ————1986年J.A. McClarin等通过X射线晶体衍射发现II类限制酶是以同源二聚体（homodimer) 的形式与靶序列结合。

• [ ] 但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异,有些是隔开的。

  酶促反应除Mg2+外，也需要ATP供给能量。

• [ ] II s型限制性内切酶

  与II 型具有相似的辅因子要求，识别位点非对称，非间断。4-7bp

  移动切割（shifted cleavage)：在离它的不对称识别位点一侧的特定距离处切割DNA双链。

  • eg： HgaⅠ

• [ ] 切口酶（nicking enzyme）

  只切割双链DNA中的一条链，造成一个切口，如：N.BstNBI

同裂酶与同尾酶

• 同裂酶（isoschizomer）：来源不同，识别位点的序列相同的限制性内切酶
  • **完全同裂酶 ：**识别位点和切点完全相同- - -HindⅢ 和HsuⅠ（AAGCTT)
  • **不完全同裂酶 ：**识别位点相同，但切点不同- - - SmaⅠ和XmaⅠ（CCCGGG)
  • “同功多位”：许多识别简并序列的酶包含了另-种酶的识别序列- - - EcoR 和 Apolo
• 同尾酶（isocaudamer)：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端
  • 同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别。
  • 同尾酶：BamH I与Bgl II；Sal I与Xho I；Spe I与Xba I**

限制性内切酶的星活性

<aside> ⭕ 星活性：在非标准反应条件下【高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值、含有机试剂、非Mg2+离子等】，限制性核酸内切酶能切割与识别序列相似的序列，降低酶切反应的特异性，这个改变的特殊活性称作星活性

• 限制性内切酶的识别和酶切活性一般在- -定的温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。所以一般使用专一的反应缓冲液。 </aside>

• 星活性产生的原因- - - 没有按照酶切的标准条件进行

• 常发生星活性的内切酶有：EcoRI、HindⅢ、KpnI、PstI、SalI、HinfI等。

影响限制性内切酶活性的因素

• DNA的纯度
• DNA的甲基化程度
• 浓度
• 温度