密度梯度离心

通过离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率在密度梯度溶液中沉降,形成不同的沉降带

差速离心只能将那些大小显著不同的成分分开。速度沉降(velocity sedimentation)则可进行更精细的分离。分离方法是在离心管中加入稀盐溶液,将细胞的抽提液在盐溶液上覆一薄层

为防止对流混合,在离心管中制备由顶部到底部逐渐增加的庶糖溶液的密度梯度(通常5%~20%)。离心后混合物中的各成分以不同的速度沉降,形成不同的沉降带,各沉降带可分别收集。不同组分的沉降速率取决于它们的大小与形状,通常用沉降系数(s)值表示。许多细胞组分,如蛋白质和核酸的沉降系数在1~200S之间。目前超速离心机的转速可以达到85 000转/分,产生的离心力为重力的600 000倍。在这样巨大的离心力下,即使较小的生物分子,如tRNA分子和简单的酶分子都可根据它们的大小将其分开。

超速离心法可以根据生物大分子的沉降系数较精确的测定其分子量。

Untitled