20世纪80年代后相继建立了能够定量检测RNA和蛋白质分子的Northern、Western印迹分析技术(Blotting)。其基本过程都包括:电泳分离待检测分子,将待检测分子转移到可方便操作的硝酸纤维素膜或PVDF膜上,然后将带有报告基团的探针(或抗体)与膜杂交(或孵育),最后通过同位素或化学发光试剂显示目的分子的条带,通过条带的深浅可判断目的分子的含量和分子量大小

Northern印迹分析:

是检测组织或细胞中特异性mRNA的方法。它以带有放射性或非放射性物质标记的单链cDNA、RNA片段或寡核苷酸为探针,检测RNA分子,不仅能够定量检测基因表达水平(mRNA)的变化,而且能够提供基因不同转录本的转录长度信息。对小的RNA分子,如长度约20nt的miRNA分子,Northern印迹分析也能有效地检测。在进行检测时,首先从组织或细胞中提取总RNA或mRNA, 在琼脂糖凝胶电泳之前需要对RNA样品进行变性处理,以破坏RNA分子中的局部双螺旋结构,使整个RNA分子呈单链(便于分子杂交)。常用变性剂为甲醛或戊二醛。

Western印迹分析:

检测的是蛋白质分子,它是在蛋白质水平定量检测基因表达改变的主要方法,首先将经细胞裂解而获得的蛋白质样品进行SDS-PAGE分离,然后依次经过印记、抗体孵育和显示蛋白质条带等步骤。Western印迹分析以抗体分子作为检测分子,不仅能够识别细胞中不同种类的蛋白分子,而且能够识别同一种蛋白分子的不同修饰方式,如磷酸化、甲基化、泛素化等,是考察蛋白质含量、大小和活性状态的重要方法。

印迹分析是低通量的检测技术,步骤较繁琐,花费时间长。但印迹分析检测不需昂贵设备,结果准确,少有假象,也常被用于验证生物芯片等高通量研究方法获得的结果。