<aside> 🍁 基因文库（gene library）

• 将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片断，并将所有这些片断都与适当的载体连接，引入相应的宿主细胞中保存和扩增。理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因，称为基因文库。

• 基因组文库的大小：N=ln (1-p)/ln (1-f)=4.61 G/f </aside>

• [ ] 构建基因文库的载体选用

  载体能够容载的DNA片断大小直接影响到构建完整的基因文库所需要的重组子的数目

  • 对载体的要求：载体容量越大，所要求的DNA片断数目越少，所需的重组子越少
  • 目前常用的载体：λ载体系列（ 容量为 24 kp）、cosmid载体（容量为 50 kb）、YAC：（容量为 1 Mb）、BAC（容量为 300 kb）

<aside> 🍁 基因文库构建的一般步骤

• [ ] 染色体DNA大片段的制备

  断点完全随机，片断长度合适于载体连接。不能用一般的限制性内切酶消化法

  物理切割法：超声波（300bp）或机械搅拌（8kb）

  酶切法：内切酶Sau3A进行局部消化。可得到10-30kb的随机片断

• [ ] 载体与基因组DNA大片段的连接

  粘性末端直接连接：载体与外源DNA大片段的两个末端都有相同的粘性末端

  人工接头法（adapter）：人工合成的限制性内切酶粘性末端片断

  同聚物加尾：末端转移酶 - → 粘性末端

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