• [ ] 转基因植物：转基因植物是指利用基因工程原理和技术，将感兴趣的基因在植物中进 行表达并实现稳定遗传。通过转入基因的表达改变了植物的遗传性状，使转基因植物品质改善、抗性增强、改变花色等等。

方法

<aside> 🍁 农杆菌诱导

根癌农杆菌是一种植物致病菌。可以在60%的双子叶植物和裸子植物中诱导肿瘤，这种肿瘤诱导特性同样也是植物转基因研究与农业应用的重要工具。

诱导冠瘿的农杆菌中有一个巨大的质粒Ti用于传递毒性

T-DNA被发现了能插入植物基因组，使得将“任何基因”转入植物细胞称为可能。肿瘤诱导基因和冠瘿碱合成基因可以被替换成任意的感兴趣的基因和选择标记基因。

• 野生型Ti **分子量大，限制性位点多，含有影响植物生长的因子……** —— 改造 </aside>

• 步骤

(1)农杆菌对受体的识别与附着（创伤组织分泌趋化物质）

(2)农杆菌对特异的植物信号分子的感应;

(3) virG 介导的信号传导及毒性基因的活化;

(4)毒性蛋白作用产生T-DNA单链;

(5)毒性蛋白转移复合体的形成及T-DNA和毒性蛋白进入宿主胞质;

(6)成熟T-DNA复合体的形成;

(7) T-DNA复合体在植物及细菌的作用下被摄入细胞核;

(8) T-DNA整合进入植物基因组。

• 结构

• 双元载体系统

<aside> 🍁 物理方法：基因枪转化法

外源DNA获得加速度，通过小孔进入受体

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<aside> 🍁 花粉管通道法

在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。

该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。

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筛选

• [ ] 要设置 阳性对照、阴性对照

一、根据报告基因筛选和检测

报告基因：指编码产物能够被快速测定，常用来判断外源基因是否已经成功导入寄主细胞并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。

根据报告基因编码特点:

• 抗性基因（抗生素抗性基因，抗除草剂基因）
• 显色或发光报告基因（GUS、 荧光素酶、绿色荧光蛋白）

二、分子生物学检测方法

根据检测不同阶段区分:

• 基因组DNA检测法：检测外源DNA是否已经整合到植物基因组中，PCR, Southern杂交， 原位杂交。
• RNA检测法：判断外源基因是否转录，RT-qPCR，Northern杂交，原位杂交。
• 蛋白质检测法：判断外源基因是否翻译，ELISA, Western杂交，原位杂交。