<aside> 🍁 受体细胞(receptor cell)——感受态
又称为**宿主细胞或寄主细胞(host cell)**等,从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞。从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。
感受态(competence)
感受态细胞(competent cell)
选择受体细胞的原则
基因诱导表达过程 </aside>
[ ] 优点:表达产物经过正确修饰,一般具有天然活性。
[ ] 缺点:操作比较复杂,表达量较低,成本较高。
<aside> ⭕ 报告基因
报告基因:指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。
必须具有以下几个条件:
①已被克隆和全序列已测定;
②表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;
③其表达产物能进行定量测定。
表达载体: 诱导型载体如pBM150(GAL1启动子),pAM82(PHO5酸性磷酸酯酶启动子);
**组成型载体:**pAAh5(ADH1,醇脱氢酶启动子)。
宿主细胞:营养缺陷型菌株如URA3-,LEU2-,HIS3-,TRP1-等。
表达载体:SV40复制起点,病毒启动子 (CMV,SV40 等)
宿主细胞:人Hela细胞,仓鼠CHO细胞,小鼠3T3细胞等
昆虫细胞(家蚕)
具有真核生物的特征,外源基因表达量高,繁殖相对较快,培养成本低廉,遗传稳定;DNA重组操作系统欠完善;适用于真核生物基因的高效表达。
哺乳动物细胞(中国仓鼠卵巢细胞CHO)
与人的亲缘关系近,分子重组表达系统健全,具有合适的糖基化修饰系统;细胞培养条件苛刻,生长缓慢;适用于哺乳类动物和人的基因表达调控研究、基因药物的生产,是DNA重组实验和基因工程的主要哺乳动物受体。
表达载体:CaMV-35S启动子,Ti质粒左右边界
宿主细胞:烟草TBY2细胞、拟南芥