10X Genomics起源自Drop-Seq技术。

该平台可通过快速高效的单细胞标记、测序和分析,获得单细胞水平的基因表达谱,对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱。与其他大规模单细胞分选平台相比,该平台通量高,周期快速,成本低,细胞捕获效率高,并且商业化仪器操作简便。但其对细胞活性要求较高,大于90%

原理:基于微流控技术、油包水进行单个细胞分选

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  1. 将单个细胞与含有条形码(barcode)和引物(umi+ploy(dT)VN)的凝胶珠包裹在一个油滴。从横向孔道中逐一输入凝胶微珠,第一纵向孔道输入细胞,凝胶微珠(barcode+umi+ploy(dT)VN)与细胞碰撞后会吸附在凝胶微珠上,并通过微流控技术,将之输入到第二纵向孔道,即油相孔道中。这时候,就形成了一个个油滴,最终输出并收集在EP管中。每一个油滴中会落入一个细胞以及一个凝胶微珠,那么在每一个凝胶微珠中上长满了不同的Cell Barcode和UMI Barcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,构成我们的捕获凝胶微珠。而这个凝胶微珠抓手就会使用oligo dT抓住mRNA构建文库。该过程可使细胞标记上特殊的barcode,从而达到单细胞测序的目的。

  2. 之后在每个油滴内,凝胶珠溶解,细胞裂解释放mRNA,通过逆转录产生用于测序的带条形码的cDNA

  3. 液体油层破坏后,cDNA后续进行文库构建,使用Illumina测序平台对文库进行测序检测,即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据,10min内自动完成多至80,000个细胞的捕获,从而达到在单细胞水平进行表达测序的目的。

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